干扰素-γ对重症肌无力患者自身抗体的调节作用及相关?

                
            中国神经免疫学和神经病学杂志 2000　vol.7　no.4　p.234-236,262

            干扰素-γ对重症肌无力患者自身抗体的调节作用及相关性分析

            王炜　南振鸿　凌振芬　管红兵　吕传真

            摘要:目的　了解重症肌无力患者自身抗体的产生与细胞因子的关系。方法　采用免疫酶点方法检测22例重症肌无力患者外周血achrab分泌细胞和ifn-γ分泌细胞。结果　重症肌无力患者外周血achrab分泌细胞和ifn-γ分泌细胞均高于正常对照组，achrab
            和ifn-γ之间呈高度正相关性，不同亚型之间两种分泌细胞差异均无显著性。结论　重症肌无力患者体内有ifn-γ分泌细胞增高,ifn-γ与achrab的相关性提示ifn-γ可能对重症肌无力患者自身抗体的产生有促进作用。

            　　重症肌无力(myasthenia
            gravis,mg)是一种t淋巴细胞依赖性的，抗体介导的自身免疫性疾病，其特征是骨骼肌极易疲劳，目前已知mg是由于achrab的产生，并与突触后膜上achr结合所致［1］；细胞因子在mg自身抗体的产生中起着重要作用［2］，干扰素-γ(ifn-γ)是一种重要的细胞因子，有学者发现mg患者体内有高水平的循环ifn-γ［3］，而有的学者则检测不到ifn-γ的存在［4］；在实验性的mg(eamg)中，也有不相一致的结论［5，6］。我们曾检测了achrab
            阳性和阴性mg患者外周血中ifn-γ分泌细胞，初步了解到二者之间的相互关系［7］。本实验进一步检测了mg患者外周血achrab分泌细胞和ifn-γ分泌细胞，并进行了相关分析，以期进一步了解ifn-γ在mg自身抗体产生中的作用。

            1　材料和方法

            1.1　研究对象　实验组mg患者共22例，其中男性7例，发病年龄在32～70岁，平均51.4岁；女性15例，发病年龄为7～67岁，平均36.3岁。根据osserman标准诊断和分型［8］，其中?型9例，?a型5例，?b型4例，?型4例。取样本期间，未服用任何药物者5例，仅服用抗胆碱酯酶药物者9例，服用强的松者6例，服用免疫抑制剂者2例。对照组取自年龄、性别基本相匹配的健康体检者22例，年龄18～60岁，平均45.5岁。

            1.2　材料与试剂　40孔硝酸纤维膜板ha-801，华东师范大学化学系产品；rpmi
            1640，gibco公司；ficoll-hypaque淋巴细胞分离液(比重1.007+0.001)，上海试剂二厂；小鼠抗人ifn-γ单抗(mahifn-γ)、兔抗人ifn-γ多抗(rah
            ifn-γ)，medgenix公司；生物素标记羊抗兔igg(b-sarg)、生物素标记的羊抗人igg(b-gahg)、aec，sigma公司；abc，vector公司；人骨骼肌achr提取液，参照lu报道方法完成［9］。

            1.3　方法　采用单细胞水平检测抗体分泌细胞及细胞因子分泌细胞的免疫酶点方法(elispot)［10］，分别以2
            mg/l的mahifn-γ和5 mg/l的achr包被40孔硝酸纤维膜板，用ficoll-hypaque液分离单核细胞，用rpmi
            1640完全培养液调整细胞浓度到1×106个/ml，各加200 μl到已包被的硝酸纤维膜板每孔中，置37℃、5% co2
            (体积分数)孵箱中培养48
            h，前者依次加rahifn-γ、b-sarg，后者加b-gahg，随后二者分别依次加入abc、aec，终止反应后显微镜下计数膜板上的酶点数。培养过程中每孔均加0.1
            kg/l人骨骼肌achr提取液10 μl，均设复孔取平均值。

            2　结果

            2.1.　实验组和对照组外周血achrab
            分泌细胞和ifn-γ分泌细胞的酶点数经两样本均数比较的t检验结果示，差异有显著性，即mg患者achrab
            和ifn-γ分泌细胞均高于健康对照组。

            2.2.　实验组achrab
            分泌细胞和ifn-γ分泌细胞的酶点数进行相关性分析结果示，r值为0.802，p＜0.0005，表明二者呈显著直线相关关系，也即ifn-γ与achrab
            的产生有着密切关系。

            2.3.　为了解药物是否对achrab
            分泌细胞和ifn-γ分泌细胞产生影响，我们按照不同药物的情况将mg患者分成4组，并进行方差分析，结果表明4组患者achrab
            分泌细胞和ifn-γ分泌细胞均没有差别，p值均大于0.05。

            2.4.　本组患者根据发病类型分成4组，对achrab
            分泌细胞和ifn-γ分泌细胞进行方差分析，以了解与临床分型的关系，结果发现各类型mg患者之间achrab 分泌细胞
            和ifn-γ分泌细胞没有差异,p值均大于0.05。

            3　讨论

            　　虽然约85%～90%mg患者体内可以检测到achrab,但其滴度与疾病的严重程度无关，表明mg不仅只有体液免疫反应异常，而有关细胞因子对mg自身抗体的作用研究显得很重要。

            　　ifn-γ是一种重要的细胞因子，主要由t淋巴细胞受到抗原刺激后产生，在免疫系统发挥重要作用，包括促进b细胞增殖分泌自身抗体。目前研究表明，ifn-γ无论在mg
            或eamg的发病过程中均具重要作用。本实验中，我们观察到mg患者外周血中achrab分泌细胞和ifn-γ分泌细胞较正常对照均增高，并且二者之间有很好的相关性，证明ifn-γ对mg自身抗体的产生起重要促进作用。但ifn-γ分泌细胞在多发性硬化等疾病中也增高，因此它不能作为mg的特异性标志。

            　　本实验结果显示，不同药物治疗的患者其分泌细胞差异无显著性，表明药物的治疗并不影响ifn-γ和achrab分泌细胞的产生，不管该药物治疗是否有效。

            　　各类型的mg患者，其外周血中ifn-γ和achrab分泌细胞均增高，表明ifn-γ的作用与临床类型无关。

            参考文献：

            ［1］　 newsom-davis j. autoimmunity in neuromuscular disease［j］. ann
            ny acad sci， 1988，540：25-38.
            ［2］　 rouveix b,blin o. pharmacological basis of immunotherapy in
            autoimmune diseases［j］. clin neuropharmacol， 1993，16(2)：104-112.
            ［3］　 kott e,hahn t,huberman m,et al. interferon system and natural
            killer cell activatity in myasthenia gravis［j］. qjm，
            1990，76(281)：951-960.
            ［4］　 confalonieri p,antozzi c,cornelio f,et al. immune activation in
            myasthenia gravis:soluble interleukin-2 receptor,interferon gamma
            and tumor necrosis factor-α levels in patients？ serum［j］. j
            neuroimmunol, 1993,48(1)：33-36.
            ［5］　 asthana d,fujii y,huston ge,et al. regulation of antibody
            production by helper t cell clones in experimental autoimmune
            myasthenia gravis is mediated by il-4 and antigen-specific t cell
            factors［j］. clin immunol immunopathol, 1993,67：240-248.
            ［6］　 wang zy,link h,ljungdahl a.et al. induction of
            interferon-γ,interleukin-4,and transforming growth factor-β in rats
            orally tolerized against experimental autoimmune myasthenia
            gravis［j］. cell immunol, 1994,157(2)：353-368.
            ［7］　 王　炜，吕传真，肖保国. achrab阳性和阴性重症肌无力患者il-4和ifn-γ分泌细胞的检测［j］.
            中国神经免疫学和神经病学杂志， 1997,4(4)：195-198.
            ［8］　 osserman ke. myasthenia gravis［m］. new york：grune & stratton,
            1958.79.
            ［9］　 lu cz,link h,mo xa,et al.　anti-presynaptic membrane receptor
            antibodies in myasthenia gravis［j］. j neurol sci, 1991,102(1)：39-45.
            ［10］　 czerkinsky c,nilsson la,nygren h,et al.　a solid-phase
            enzyme-linked immunospot (elispot) assay for enumeration of specific
            antibody-secreting cells［j］. immunol methods, 1983,65(1-2)：109-121.