重症肌无力与人类嗜T淋巴细胞
Ⅰ型病毒抗原的关系

邓丽影　何士勤

　　自美国学者Gallo于1980年首次发现人类嗜T淋巴细胞Ⅰ型病毒(humanT-lymphotropicvirusⅠ,HTLV-1)以来，已有众多证据表明该病毒是人类T淋巴细胞白血病、淋巴瘤的病原体，而且与人类某些肿瘤和自身免疫性疾病相关，近来又发现与某些神经系统疾病有关。由于抗体检测阳性率低，故我们采用抗原检测法对HTLV-1与重症肌无力的关系进行了研究。

1　资料和方法
1.1　资料
1.1.1　对照组　健康成人21例，男11例，年龄28～65岁，平均38.9岁；女10例，年龄18～42岁，平均25.7岁。献血员50例。
1.1.2　重症肌无力组　25例，男8例，年龄8～44岁，平均22.5岁；女17例，年龄2～44岁，平均15.1岁。25例患者中23例为Ⅰ型重症肌无力，另有2例分别为Ⅱ_A、Ⅱ_B型。
1.2　方法
1.2.1　培养细胞　取肝素化外周血5～10ml，加入等量RPMT1640液稀释，按1∶1比例沿管壁缓慢加入盛有淋巴细胞分离液的试管中，置水平离心机中，400×g离心30分钟，吸取中间层有核细胞，以1640液洗3次，将细胞浓度调至2×10⁶/L，另加入10%的灭活小牛血清PHA10mg/L(1%)，20%的植物血凝素白细胞条件培养液(PHA-LCM)，置CO₂孵箱中，维持37℃温度和饱和湿度，培养3或6天。
1.2.2　制备细胞片　取细胞培养物，400×g离心10分钟，吸出上清液，用pH7.6、浓度为0.01mol/L的PBS洗细胞3次，将细胞配成适当浓度，涂于带孔的玻片上，室温干燥，用冷丙酮4℃固定15分钟，密封于塑料袋中，保持干燥4℃存放。
1.2.3　荧光染色　在上述细胞片上，分别于不同的细胞孔内，滴入HTLV-1阳性血清HTLV-1阴性血清和PBS，37℃孵育30分钟，用PBS洗3次，每次5分钟。分别于上述各孔内加入适当浓度的荧光抗体，37℃孵育40分钟，PBS洗3次，用50%的PBS甘油封载，荧光镜检查(Nikn)，计算200～500个细胞中荧光染色阳性细胞数。

2　结　果
　　25例重症肌无力患者血细胞HTLV-1抗原检测阳性的有5例(20%)，男2例，女3例，其中4例为Ⅰ型重症肌无力患者，1例为Ⅱ_B型患者。对照组71名无1例阳性。重症肌无力组与对照组阳性率比较，有非常显著性差异(P<0.01)。

3　讨　论
　　人类HTLV-1的微生物学诊断，主要有血清抗体、血细胞抗原和细胞前病毒核酸3种。病毒核酸检测只有少数实验室能作，而血清抗体检测阳性率低，且不能除外被动输入和正常携带者的可能，即使在献血员亦有4%的阳性。因此，我们选用荧光免疫法直接检测血细胞中HTLV-1的抗原，以了解感染的真实情况。
　　重症肌无力是一种自身免疫性疾病，主要是T淋巴细胞功能障碍，体内存在多种免疫复合物和抗体，但对于真正的免疫刺激原还不清楚。1985年Aoki等和Klavinskis等分别检测重症肌无力患者胸腺组织及血中的常规病毒抗原及抗体，结果均无阳性发现。因此，有必要进行非常规病毒感染的研究。在本组实验中首次发现5例(5/25)患者血细胞中HTLV-1抗原阳性，而对照组71例均为阴性，提示重症肌无力的发病可能与HTLV-1的感染有关。由于是一种慢病毒感染，病毒可在靶细胞中长期存在，持续感染。因此，重症肌无力者临床上的不断缓解和复发可能与之有关。5例HTLV-1抗原阳性者，1例未曾复发，4例复发者，病程分别为7、9、16、4年，缓解后复发次数分别为1、6、4、1次。
　　HTLV-1是人类新的C型逆转录酶RNA病毒，主要侵入CD4⁺、CD8⁺细胞以及B细胞、巨噬细胞。主要使杀伤性、辅助性T细胞免疫功能丧失，选择性的致死细胞毒性T细胞，引起多克隆性B细胞激活，产生许多淋巴因子，使患者产生一系列继发症状。
　　我们对HTLV-1与重症肌无力的关系进行了初步研究，至于HTLV-1在重病肌无力发病中的确切地位，以及有没有假阴性，影响因素如何，有没有双重感染或多重感染的可能，还有待于进一步研究。

(原载《中华神经精神科杂志》1995年第5期)